使用UV法應(yīng)注意以下環(huán)節(jié)：
儀器的校正和檢定：
1．1 波長(zhǎng)：
由于溫度變化對(duì)機(jī)械部分的影響，儀器的波長(zhǎng)經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng)，因此除應(yīng)定期對(duì)所用的儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)于測(cè)定前校正測(cè)定波長(zhǎng)。
1．2 吸收度 吸收度的準(zhǔn)確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。
1．3 狹縫寬度
選擇儀器的狹縫寬度，應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，對(duì)于《中國(guó)藥典》UV法測(cè)定的大部分品種，可以使用2nm縫寬，但對(duì)某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度檢查則需要1nm縫寬或更窄，否則其264nm的吸收度會(huì)偏低。
1．4 天平和玻璃儀器的檢定：所用的容量?jī)x器及分析天平應(yīng)經(jīng)過(guò)檢定，如有偏差應(yīng)加上校正值。
1．5 吸收池配對(duì)：
石英吸收池對(duì)紫外光亦有吸收，1 em的吸收池在波長(zhǎng)220～270 nm的范圍內(nèi)，以空氣作為100％，其透光率往往小于100％，同時(shí)每個(gè)吸收池不可能完全相同，故在每次測(cè)定前應(yīng)做吸收池配對(duì)試驗(yàn)。方法是取干燥潔凈的吸收池，均裝入測(cè)定用空白溶劑，以一只吸收池作空白，用測(cè)定時(shí)所用的波長(zhǎng)測(cè)定其他吸收池的吸收度，最后選擇吸收最小的一只作為配對(duì)，測(cè)定并記錄下其它吸收池的吸收度，供試品液的實(shí)際吸收度應(yīng)是與吸收池(有空白溶劑時(shí))吸收度之差。為減少誤差，常用一個(gè)配對(duì)杯測(cè)定若干樣品(也減少計(jì)算麻煩)，但應(yīng)注意換液時(shí)充分洗滌。
由于溶劑與溶質(zhì)分子間形成氫鍵、偶極化等的影響，可以使溶質(zhì)吸收波長(zhǎng)發(fā)生位移。通常極性溶劑比非極性溶劑的影響大，在選擇溶劑時(shí)應(yīng)予以注意。測(cè)定供試品前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在測(cè)定供試品所用的波長(zhǎng)附近是否有吸收峰，是否影響供試品測(cè)定。每次測(cè)定時(shí)應(yīng)采用同一廠家、同一批號(hào)的試劑配制混合均勻的同一批溶劑。
3．1 溶液配制：
稱量應(yīng)按藥典規(guī)定進(jìn)行。配制測(cè)定溶液時(shí)稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，轉(zhuǎn)移稀釋時(shí)所取容積一般應(yīng)不少于5mL。含量測(cè)定供試品應(yīng)稱取2份，如為對(duì)照品比較法，對(duì)照品也應(yīng)稱取2份。吸收系數(shù)檢查也應(yīng)稱取供試品2份，平行操作。每份結(jié)果對(duì)平均值的偏差應(yīng)在4-0.5％以內(nèi)。作鑒別或檢查時(shí)可取樣品1份。
3．2 測(cè)定：
除另有規(guī)定外，應(yīng)在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)4-2 nm以內(nèi)，再測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰最大波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)4-1nm以內(nèi)，否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)巍⒓兌纫约皟x器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度。取吸收池時(shí)，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。樣品溶液的量以池體積的4／5為宜，使用揮發(fā)性溶液時(shí)應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無(wú)殘留溶劑，為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭，然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放人樣品室時(shí)應(yīng)注意每次放入的方向相同。使用后用洗滌劑及水沖洗干凈，晾干防塵保存。吸收池如污染不易洗凈時(shí)可用發(fā)煙硫酸+硝酸(3：1 )混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時(shí)，吸收池不宜在清潔液中長(zhǎng)時(shí)間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結(jié)晶會(huì)損壞吸收池的光學(xué)表面，并應(yīng)充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。
3．3 讀數(shù)：
一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.3～0.7之間為宜，吸收度在此范圍誤差較小。
